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上海雅吉生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 免疫組化試劑盒，對照品，抗體，細胞血清，Elisa試劑盒 |
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2016-10-9 閱讀(174)
實驗方法原理 用培養(yǎng)液制備細胞懸液，將懸液注入單元的各小室內(nèi)。使長邊朝下，放置。將單元旋轉(zhuǎn) 90°，放平后用 CO2 充氣。然后封閉，進行培養(yǎng)。
實驗材料 單層細胞0.25%天然*D-PBSA
試劑、試劑盒 生長培養(yǎng)液
儀器、耗材 Nunc細胞工廠硅酮管和連接器*或電子細胞計數(shù)器和計數(shù)用液體
實驗步驟
1. 用*消化后，將細胞懸浮，計數(shù)細胞，用 2 L 培養(yǎng)液將懸液稀釋至細胞密度為 2×104 個/ml。
2. 使小室長邊朝下，放置，將培養(yǎng)液供應(yīng)管與 Luer 連接管相接，再通過供應(yīng)管與底孔連通。
3. 經(jīng)供應(yīng)管加入細胞和培養(yǎng)液。所有培養(yǎng)小室內(nèi)的液體將達到相同水平。
4. 按單層細胞平面將小室轉(zhuǎn)動 90°，使單元的短邊朝下，放置，使進孔和供應(yīng)管朝上。
5. 在 Luer 連接管處，中斷供應(yīng)管與培養(yǎng)液儲存器的連接。
6. 與細胞單層平面垂直，將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)動 90°，以底部放平，使培養(yǎng)面呈水平位。
7. 用 5% CO2 空氣向單元充氣 5 min，然后夾住供應(yīng)管和出口。如果需要，可連續(xù)充氣。
8. 倒掉供應(yīng)管和出口內(nèi)的培養(yǎng)液，然后將單元移入培養(yǎng)箱。
9. 更換培養(yǎng)液（或收集培養(yǎng)液）時，按步驟 6 的相反程序操作。除去輸入管上的濾器，然后按步驟 4 相反程序操作。
10. 擦洗 Luer 連接管，松開夾具，使培養(yǎng)液流出。
11. 按步驟 2~8 更換培養(yǎng)液。
12. 收集細胞。
(a)按步驟 9 和步驟 10 除去培養(yǎng)液。
(b)加入 500 ml D-PBSA，然后除去。
(c)加入 4°C 的 500 ml *，30 s 后除去。
(d)用剩余的*將細胞消化 15 min。
(e)加入培養(yǎng)液，搖動培養(yǎng)小室，使細胞懸浮。
(f)按步驟 9 和步驟 10 取出含細胞的培養(yǎng)液。
13. 殘留細胞可用于接種下一批細胞，雖然這種方法難以控制接種密度。是將培養(yǎng)小室丟棄，用新的小室重新開始培養(yǎng)。
