技術(shù)文章
SDS-PAGE的主要應(yīng)用有哪些?
閱讀:119 發(fā)布時間:2018-12-24SDS-Page 因易于操作,而具有廣泛的用途,是許多研究領(lǐng)域的重要的分析技術(shù)。
1. 蛋白質(zhì)純度分析;
2. 蛋白質(zhì)分析量的測定,根據(jù)遷移率大小測定蛋白質(zhì)亞基的分子 量;
3. 蛋白質(zhì)濃度的測定;
4. 蛋白質(zhì)水解的分析;
5. 免疫 沉淀蛋白的鑒定;
6. 免疫印跡的步;
7. 蛋白質(zhì)修飾的鑒定;
8. 分離和濃縮用于產(chǎn)生抗體的抗原;
9. 分離放射性標(biāo)記的蛋白質(zhì);
10. 顯示小分子多肽。
SDS-PAGE有效分離范圍取決于聚丙烯酰胺的濃度和交聯(lián)度,其孔徑隨著雙丙烯酰胺與丙烯酰胺比率的增加而減小,比率接近于1:20時,孔徑達(dá)到小值。分子量低于10kD的小分子肽類,即使用較高濃度的聚丙烯酰胺凝膠的SDS-PAGE也不能*分離,或是顯不出色,或是顯帶較弱,帶型彌散。且分子量越小,效果也越差。
為了能在SDS-PAGE上顯示測定小分子量的多肽,通常采取兩種方法:一是增加凝膠的濃度和交聯(lián)度,在制膠時加入一些可以降低聚丙烯酰胺凝膠網(wǎng)限孔徑的溶質(zhì)分子,使用尿素、甘油或蔗糖等物質(zhì);二是選擇緩沖液中的拖尾離子的種類和濃度以達(dá)到改善多肽的分離效果。